DC60 (28/06/55)
การประดิษฐ์ปัจจุบันนี้เกี่ยวข้องกับกระบวนการสำหรับการปรับปรุงการผลิตของเมไธโอนีน
(methionine) โดยการเพาะเลี้ยงจุลชีพซึ่งถูกดัดแปลงสำหรับการเพิ่มการแสดงออกของยีนซึ่งเกี่ยวข้อง
กับการสังเคราะห์ซัคซิเนต ดีไฮโดรจีเนส (succinate dehydrogenase) จุลชีพนั้นถูกดัดแปลงในลักษณะ
ที่ผลได้ของเมไธโอนีน/แหล่งคาร์บอน ถูกทำให้เพิ่มขึ้น การแยกเดี่ยวของเมไธโอนีนออกจากอาหาร
ที่ใช้ในการหมักก็ถูกขอถือสิทธิด้วยเช่นกัน
การประดิษฐ์ปัจจุบันนี้เกี่ยวข้องกับกระบวนการสำหรับการปรับปรุงการผลิตของเมไธโอนีน
(methionine) โดยการเพาะเลี้ยงจุลชีพซึ่งถูกดัดแปลงสำหรับการเพิ่มการแสดงออกของยีนซึ่งเกี่ยวข้อง
กับการสังเคราะห์ซัคซิเนต ดีไฮโดรจีเนส (succinate dehydrogenase) จุลชีพนั้นถูกดัดแปลงในลักษณะ
ที่ผลได้ของเมไธโอนีน/แหล่งคาร์บอน ถูกทำให้เพิ่มขึ้น การแยกเดี่ยวของเมไธโอนีนออกจากอาหาร
ที่ใช้ในการหมักก็ถูกขอถือสิทธิด้วยเช่นกัน
แก้ไข 27 กย. 61
ข้อถือสิทธิ
1. วิธีการสำหรับการผลิตเมไธโอนีน (methionine), ในกระบวนการหมักที่ประกอบรวมด้วย
ขั้นตอนต่อไปนี้:
- การเพาะเลี้ยงจุลชีพซึ่งถูกดัดแปลงซึ่งถูกเลือกจากแบคทีเรีย Enterobacteriaceae และ
Coryneform ด้วยการแสดงที่เพิ่มขึ้นของยีนที่เกี่ยวข้องกับการวิถีการสังเคราะห์ทางชีวภาพของ
เมไธโอนีนเทียบกับจุลชีพซึ่งมิได้ถูกดัดแปลง, ในอาหารเพาะเลี้ยงเชื้อที่เหมาะสมที่ประกอบรวมด้วย
แหล่งของคาร์บอน และ แหล่งของซัลเฟอร์, และ
- การกู้กลับคืนเมไธโอนีนจากอาหารเพาะเลี้ยงเชื้อ,
โดยที่จุลชีพถูกดัดแปลงเพิ่มเติมโดยการเพิ่มการแสดงออกของยีนที่ถอดรหัสสำหรับเอนไซม์ซัคซิเนต
ดีไฮโดรจีเนส (succinate dehydrogenase) ถูกทำให้สำเร็จได้โดยการสอดแทรกเข้าไปในจุลชีพ
อย่างน้อยหนึ่งสำเนาเสริมของสี่ยีน sdhA, sdhB, sdhC, และ sdhD ของ E.coli
+++++++++++++++++++++
1. วิธีการสำหรับการผลิตเมไธโอนีน (methionine), ในกระบวนการหมักที่ประกอบด้วย
ขั้นตอนต่อไปนี้:
- การเพาะเลี้ยงจุลชีพซึ่งถูกดัดแปลงสำหรับการผลิตที่ถูกปรับปรุงของเมไธโอนีนในอาหาร
เพาะเลี้ยงเชื้อที่เหมาะสมที่ประกอบด้วยแหล่งคารืบอน และ แหล่งของซัลเฟอร์ และ
- การกู้กลับคืนเมไธโอนีนจากอาหารเพาะเลี้ยงเชื้อ,
โดยที่จุลชีพถูกดัดแปลงเพิ่มเติมโดยการเพิ่มการแสดงออกของยีนที่ถอดรหัสสำหรับเอนไซม์ซัคซิเนต
ดีไฮโดรจีเนส (succinate dehydrogenase)
2. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่เอนไซม์ซัคซิเนต ดีไฮโดรจีเนสประกอบด้วย อย่างน้อยสาม
หน่วยย่อย ซึ่งแต่ละหน่วยย่อยถูกเข้ารหัสโดยหนึ่งยีน, การแสดงออกของแต่ละยีนได้ถูกทำให้เพิ่มขึ้น
3. วิธีการของข้อถือสิทธิที่ 1 หรือ 2 โดยที่การแสดงที่เพิ่มขึ้นของยีนที่ถอดรหัสสำหรับ
เอนไซม์ซัคซิเนต ดีไฮโดรจีเนส ถูกทำให้สำเร็จได้โดยการสอดแทรกเข้าไปในจุลชีพอย่างน้อย
หนึ่งสำเนาเสริมของยีนดังกล่าว
4. วิธีการตามข้อใดข้อหนึ่งของข้อถือสิทธิที่ 1 ถึง 3 โดยที่การแสดงออกที่เพิ่มขึ้นของยีน sdh
ถู กทำให้สำเร็จได้โดยการแทรกสอดเข้าไปในจุลชีพอย่างน้อยหนึ่งสำเนาเสริมของสี่ยีน sdhA, sdhB,
sdhC และ sdhD ของ E.coli
5. วิธีการตามข้อใดข้อหนึ่งของข้อถือสิทธิที่ 1 ถึง 4 โดยที่แหล่งซัลเฟอร์ในอาหารสำหรับการ
เพาะเลี้ยงคือซัลเฟต, ไธโอซัลเฟต, ไฮโดรเจน ซัลไฟต์, ไดไธโฮเนต, ไดไธโอไนต์, ซัลไฟต์ หรือ การ
รวมกันของแหล่งที่ต่างกัน
6. วิธีการตามข้อใดข้อหนึ่งของข้อถือสิทธิที่ 1 ถึง 5 โดยที่แหล่งคาร์บอนคือกลูโคส หรือ
ซูโครส
7. วิธีการตามข้อใดข้อหนึ่งของข้อถือสิทธิที่ 1 ถึง 6 ที่ประกอบด้วยขั้นตอนของการแยกเดี่ยว
ของเมไธโอนีน จากอาหารสำหรับเพาะเลี้ยง
8. วิธีการตามข้อใดข้อหนึ่งของข้อถือสิทธิที่ 1 ถึง 7 โดยที่จุลชีพถูกเลือกจากบรรดากลุ่มที่
ประกอบด้วยแบคทีเรีย, ยีสต์ และ รา
9. จุลชีพซึ่งถูกดัดแปลงสำหรับการผลิตที่ถูกปรับปรุงของเมไธโอนีนในอาหารสำหรับการ
เพาะเลี้ยงที่เหมาะสม โดยที่จุลชีพนั้นถูกดัดแปลงเพิ่มเติมโดยการเพิ่มการแสดงออกของยีนที่ถอดรหัส
สำหรับเอนไซม์ซัคซิเนต ดีไฮโดรจีเนส
10. จุลชีพของข้อถือสิทธิที่ 9 โดยที่ซัคซิเนต ดีไฮโดรจีเนสประกอบด้วยอย่างน้อยสามหน่วย
ย่อย, ซึ่งแต่ละหน่วยย่อยถูกเข้ารหัสโดยหนึ่งยีน, การแสดงออกของแต่ละยีนนั้นถูกทำให้เพิ่มขึ้น
11. จุลชีพของข้อถือสิทธิที่ 9 หรือ 10 โดยที่การแสดงออกที่เพิ่มขึ้นของยีนที่ถอดรหัสสำหรับ
เอนไซม์ซัคซิเนต ดีไฮโดรจีเนสถูกทำให้สำเร็จผลโดยการสอดแทรกเข้าไปในจุลชีพอย่างน้อย
หนึ่งสำเนาเสริมของยีนดังกล่าว
12. จุลชีพของข้อถือสิทธิที่ 11 โดยที่การแสดงออกที่เพิ่มขึ้นของยีน sdh ถูกทำให้สำเร็จโดย
การสอดแทรกเข้าไปในจุลชีพอย่างน้อยหนึ่งสำเนาเสริมของสี่ยีน sdhA, sdhB, sdhC และ sdhD ของ
E.coli
13. จุลชีพของข้อถือสิทธิที่ 12 ที่ประกอบด้วยสำเนาเพิ่มเติมของ sdh โอเปอรอน จาก E. coli
14. จุลชีพตามข้อใดข้อหนึ่งของข้อถือสิทธิที่ 8 ถึง 13 โดยที่มันเป็นแบคทีเรียซึ่งถูกเลือกจาก
บรรดากลุ่มที่ประกอบด้วย: Enterobactoriaceae และ Coryneform bacteria
15. จุลชีพของข้อถือสิทธิที่ 14 โดยที่มันถูกเลือกจากบรรดากลุ่มที่ประกอบด้วย E. coli และ C.
glutamicum